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海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)试剂盒

更新时间:2024-05-27

简要描述:

海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)试剂盒
我公司所销售的ELISA试剂盒,品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国原装/分装等不同价格档次的盒子。
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海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)试剂盒

海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用

海藻糖-6 磷酸合成酶(TPS)试剂盒说明书 (货号:WS6550F 分光法 24 样) 一、产品简介: 海藻糖-6磷酸合成酶(TPSEC 2.4.1.15)是海藻糖合成的关键酶之一,催化UDP- 葡萄糖和葡萄糖-6磷酸生成海藻糖-6磷酸和UDPUDP与磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激 酶和乳酸脱氢酶的逐一作用下,使NADH氧化为NAD+,通过检测NADH340nm处的 下降量来计算TPS的酶活力大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部, 再加 0.9mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 液体 32mL×1 4℃保存 试剂三 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部, 再加 2.2mL 蒸馏水溶解备用。 试剂四 粉剂 mg×4 -20℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部, 分别加 0.55mL 蒸馏水溶解备用。用 不完的试剂分装后-20℃保存,禁止 反复冻融,三天内用完。 试剂五 粉剂 mg×1 -20℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部, 再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱/属浴、可调式移液器、研钵、冰。 四、海藻糖-6磷酸合成酶(TPS)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织样本,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆,12000rpm4℃离心 10min取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/真菌样本: 先收集细菌或真菌到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或真菌加入 1mL 提取 液;冰浴超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),室温晃动提取 30min8000rpm 室温(25℃)离心 10min,取上清。 【注】:若增加样本量,可按照提取液体积(mL) :细菌或真菌数量(104个)为 1500~1000 的比例提取 2、上机检测1 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 2 所有试剂解冻至室温(25℃)。 3 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 60 60本试剂盒仅供科研使用 2 试剂一 30 试剂二 210 240 混匀,35℃孵育 30min 后,立即于 95-100℃煮沸 5min10000rpm4℃离心 5min,上清液待测。 4 1mL 石英比色皿中依次加入: 试剂二 400 400 试剂三 40 40 试剂四 40 40 试剂五 20 20 ③的上清液 200 200 混匀,35℃下立即于 340nm 处读取各管吸光值 A130min 后读取 A2。△A=(A1-A2)测定-(A1-A2)对照。 【注】 1.若A 的值在零附近,可以适当延长③歩的反应时间到 60min 后或更长,改变后的反 应时间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量(如 100μL,则试剂二相应减少), 则改变后的加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。 2. 若起始值 A1 太大如超过 2(如颜色较深的样本)或ΔA 的值大于 0.4,可以适当减少 ③的上清液加样量 V3(如减少至 100μL,则试剂二相应增加),则改变后的加样体 V2 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算 单位定义:每毫克组织蛋白在每分钟内氧化 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 TPS 活力(nmol/min/mg prot=[ΔA×V4÷ε×d×109] ×(V2÷V3) ÷(V1÷Cpr) ÷T =93.8×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算 单位定义:每克组织在每分钟内氧化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 TPS 活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V4÷ε×d×109] ×(V2÷V3)÷(W×V1÷V) ÷T =93.8×ΔA÷W 3、按细菌或真菌数量计算: TPS 活力(μg/104cell)= [ΔA×V4÷ε×d×109]×(V2÷V3)÷(500×V1÷V) ÷T =0.188×ΔA V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.06mLV2---第③歩的反应总体积,0.3mLV3---第④歩中所取上清液体积,0.2mLV4---反应体系总体积,7×10-4 Ld---光径,1cmε---NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmW---样本质量,g500---细菌或真菌总数,500 万; T---反应时间,30minCpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。


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